Informations

Écran de condensation des chromosomes mitotiques

Écran de condensation des chromosomes mitotiques


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Si je souhaite rechercher des colonies de levures mutantes (S. cerevisiae) présentant des défauts de condensation chromosomique mitotique, puis-je rechercher des colonies arrêtées en phase Mid-M ? Cela fonctionnerait-il ?


La condensation mitotique des chromosomes nécessite Brn1p, l'homologue de levure de Barren

Département de pharmacologie et Département de médecine cellulaire et moléculaire, Université de Californie, San Diego, La Jolla, Californie 92093-0651.

Département de pharmacologie et Département de médecine cellulaire et moléculaire, Université de Californie, San Diego, La Jolla, Californie 92093-0651.

Département d'embryologie, Howard Hughes Medical Institute, Carnegie Institution of Washington, Baltimore, Maryland 21210 et

Département de pharmacologie et Département de médecine cellulaire et moléculaire, Université de Californie, San Diego, La Jolla, Californie 92093-0651.

Des études in vitro suggèrent que la protéine Barren peut fonctionner comme un activateur de l'ADN topoisomérase II et/ou comme un composant de laXénope complexe de condensation. Pour mieux comprendre le rôle de Barren in vivo, nous avons généré des allèles conditionnels du gène de structure de Barren (BRN1) dans Saccharomyces cerevisiae. Nous montrons que Barren est une protéine essentielle requise pour la condensation des chromosomes in vivo et qu'elle est susceptible de fonctionner comme un composant intrinsèque de la machinerie de condensation de la levure. Conformément à ce point de vue, nous montrons que Barren remplit une fonction essentielle pendant une période du cycle cellulaire lorsque la condensation chromosomique est établie et maintenue. En revanche, Barren ne sert pas d'activateur essentiel de l'ADN topoisomérase II in vivo. Finalement,brn1 les mutants présentent des phénotypes supplémentaires tels que des chromosomes étirés, des fuseaux d'anaphase aberrants et l'accumulation de cellules avec un contenu en ADN >2C, suggérant que la fonction Barren influence de multiples aspects de la transmission et de la dynamique des chromosomes.


Résumé

Des études in vitro suggèrent que la protéine Barren peut fonctionner comme un activateur de l'ADN topoisomérase II et/ou comme un composant de laXénope complexe de condensation. Pour mieux comprendre le rôle de Barren in vivo, nous avons généré des allèles conditionnels du gène de structure de Barren (BRN1) dans Saccharomyces cerevisiae. Nous montrons que Barren est une protéine essentielle requise pour la condensation des chromosomes in vivo et qu'elle est susceptible de fonctionner comme un composant intrinsèque de la machinerie de condensation de la levure. Conformément à ce point de vue, nous montrons que Barren remplit une fonction essentielle pendant une période du cycle cellulaire lorsque la condensation chromosomique est établie et maintenue. En revanche, Barren ne sert pas d'activateur essentiel de l'ADN topoisomérase II in vivo. Finalement,brn1 les mutants présentent des phénotypes supplémentaires tels que des chromosomes étirés, des fuseaux d'anaphase aberrants et l'accumulation de cellules avec un contenu en ADN >2C, suggérant que la fonction Barren influence de multiples aspects de la transmission et de la dynamique des chromosomes.


PCC MÉDICAMENTÉ

Comme décrit dans la section précédente, le PCC induit par le PEG ou le virus (PCC à médiation cellulaire) est une méthode utile pour l'analyse chromosomique, mais son utilisation est problématique. En raison de ces restrictions, le virus ou la fusion-PCC induite par le PEG n'est utilisé que dans un nombre très limité de laboratoires.

Plusieurs approches ont été menées pour induire le PCC à l'aide de produits chimiques, ce qui rendrait la procédure plus facile et fiable. Les premiers succès ont été obtenus avec la caféine et l'acide okadaïque, mais les cellules ont dû être synchronisées en phase S à l'aide d'inhibiteurs de synthèse d'ADN tels que l'hydroxyurée ou la thymidine (Schlegel et Pardee, 1986 Schlegel et al., 1990 Yamashita et al., 1990). Les chromosomes obtenus étaient donc uniquement des PCC en phase S, qui ne peuvent pas être utilisés pour l'analyse chromosomique habituelle, car ils semblent pulvérisés. Le premier rapport d'induction de PCC dans des cellules somatiques à n'importe quelle phase du cycle cellulaire, sans arrêter les cellules en phase S, est venu de Gotoh et al. (1995). Les auteurs ont utilisé la calyculine A ou l'acide okadaïque, des inhibiteurs spécifiques des protéines phosphatases de type 1 et 2A (Bialojan et Takai, 1988 Ishihara et al., 1989 Cohen et al., 1990) (Fig. 3). La calyculine A est, en particulier, capable d'induire la PCC dans de nombreux types de cellules, en suspension ou attachées, et l'indice de PCC est généralement plus élevé qu'avec d'autres inhibiteurs de la protéine phosphatase. La méthode de PCC induite par un médicament est relativement simple, elle remplace simplement l'utilisation de colcémide par la calyculine A dans le protocole de préparation de chromosome conventionnel (Gotoh et al., 1995 Durante et al., 1998a). Le temps d'incubation d'environ 30 min seulement, beaucoup plus court que le bloc colcémide (2 à 4 h), peut induire un nombre substantiel de PCC. De plus, l'indice PCC (correspond à l'indice mitotique) est généralement beaucoup plus élevé (>20%) que l'indice mitotique du protocole colcemid (∼1–2%) (Gotoh et al., 1995 Asakawa et Gotoh, 1997 Durante et al., 1998a ). Des exemples de PCC dans différentes phases du cycle cellulaire, visualisés par hybridation in situ colorée au Giemsa ou par fluorescence (FISH) avec des sondes d'ADN humain à chromosome entier, sont donnés à la figure 4. Le PCC induit par un médicament devient de plus en plus populaire, et beaucoup de rapports dans la littérature utilisant cette technique ont été récemment publiés, où cette technique est appliquée à plusieurs cellules de mammifères, soit attachées soit en suspension (Gotoh et Asakawa, 1996 Asakawa et Gotoh, 1997 Coco-Martin et Begg, 1997 Durante et al. , 1998a , 1999 Gotoh et al., 1999 , 2005 Prasanna et al., 2000 Ito et al., 2002 Bezrookove et al., 2003 Terzoudi et al., 2003 Malik et al., 2004 Blakely et al., 2005 El Achkar et al., 2005 Someya et al., 2006).

Structures moléculaires de la calyculine A et de l'acide okadaïque, deux puissants inhibiteurs de la protéine phosphatase et inducteurs du PCC. Les caractéristiques chimiques sont : Calyculine A : Formule moléculaire, C50H81N4O15P Poids moléculaire, 1009.18 IC50 pour PP1, 0,5–2 nM IC50 pour PP2A, 0,1–1 nM Source, Discodermie Calice. Acide okadaïque : formule moléculaire, C44H68O13 Poids moléculaire, 805.2 IC50 pour PPI, 10–60 nM IC50 pour PP2A, 0,1–1 nM Source, Halichondria Okadai.

Exemples de PCC dans les lymphocytes mononucléaires humains induits par la calyculine A. UNE: Une image colorée au Giemsa de trois cellules dans la même zone de la lame dans trois phases différentes du cycle cellulaire : à gauche, centre des chromosomes G1 univalents, chromosomes G2 bivalents à droite, cellule en phase S pulvérisée. B: Une insertion dans le chromosome 2, FISH-peint en spectre orange (indiqué par une flèche blanche) dans une cellule d'un patient pendant la radiothérapie. Le chromosome 1 normal est peint en vert. Une cellule de phase S est également visible sur la même image, pointée par la flèche jaune. Le PCC induit par un médicament est préférable au bloc colcémide conventionnel pour la biodosimétrie après une exposition partielle du corps, comme en radiothérapie. C: Une cellule multi-aberrante, montrant plusieurs réarrangements complexes dans les deux chromosomes 1 et 2, a suivi l'exposition à 1 Gy d'ions fer à haute énergie. Les dommages sévères induits par les rayonnements densément ionisants peuvent être sous-estimés à l'aide de l'analyse en métaphase.


DISCUSSION

Les noyaux combinés sur les graphiques d'informations biologiques sont efficaces pour la recherche d'informations

Nous avons choisi de visualiser les types de données individuels sur la fonction des gènes sous forme de graphiques et de mesurer la similarité fonctionnelle entre les gènes en tant que nœuds de ces graphiques à l'aide de noyaux en raison de leurs propriétés attrayantes pour l'intégration et l'exploration de données. Nous avons limité notre étude à quelques fonctions du noyau avec une préférence pour celles qui sont sans paramètres. Nous avons démontré que le temps de trajet était une mesure puissante et sans paramètre de similarité entre les gènes à travers divers types de données biologiques visualisés sous forme de graphiques. Il a bien fonctionné dans la récupération des relations fonctionnelles connues à partir de divers ensembles de données, et parmi tous les noyaux testés, il est apparu le plus robuste, car il a toujours donné les meilleures ou presque les meilleures performances pour chaque type de données. En revanche, les performances variaient plus largement pour les autres noyaux en fonction du type de données. En particulier, le noyau de diffusion a mal performé pour certaines valeurs de son paramètre, illustrant l'importance du choix des paramètres pour les noyaux avec des paramètres libres. À l'exception du noyau de diffusion, les noyaux dérivés de graphes que nous avons utilisés étaient moins sensibles aux biais introduits par des gènes hautement connectés. À notre connaissance, notre approche est la première à comparer les performances de différents noyaux et à identifier le meilleur noyau pour un ensemble de données particulier avant de l'intégrer à d'autres données. Nous avons en outre montré que l'intégration de plusieurs types de données améliorait la puissance de recherche d'informations et que ces types de données étaient mieux intégrés en combinant les noyaux dérivés de graphes en utilisant la meilleure fonction de noyau pour chaque type de données plutôt que les graphes eux-mêmes comme dans GeneMANIA (Mostafavi et Morris, 2010). Par conséquent, notre approche se compare favorablement aux algorithmes de pointe sur la recherche d'informations.

Les noyaux combinés sont de puissants prédicteurs de la fonction des gènes

La nature interdépendante des bases de données biologiques peut conduire à une bonne performance des méthodes de calcul dans la recherche d'informations, mais rend difficile l'évaluation des performances pour prédire de nouveaux gènes pour les fonctions biologiques. Pour tester les performances du noyau, nous avons donc testé de manière plus rigoureuse les nouvelles prédictions de la fonction des gènes en utilisant des données provenant de criblages d'ARNi à l'échelle du génome qui n'étaient pas incluses dans nos sources de données. Nous avons pu montrer que les gènes prédits par le noyau les mieux classés sont significativement enrichis dans les phénotypes attendus pour les cinq phénotypes interrogés avec des exemples de gènes (défaut de mitose, défaut de cytokinèse, motilité cellulaire accrue, réponse aux dommages à l'ADN et activation de NF-κ B). Néanmoins, bon nombre des principaux gènes prédits par le noyau n'ont pas obtenu de résultats dans les écrans examinés. Cela peut s'expliquer soit par des faux positifs dans les prédictions, soit par des faux négatifs dans les écrans. Des prédictions faussement positives pourraient être produites si la plupart des gènes de la requête ne sont pas pertinents. Par conséquent, des précautions doivent être prises dans la sélection des gènes de requête, et il peut y avoir de meilleures façons de sélectionner des gènes de requête pour un processus particulier que d'utiliser les annotations de Gene Ontology comme utilisé ici. De plus, il est probable qu'une fraction significative des gènes prédits par le noyau qui n'ont pas obtenu de score corresponde à des faux négatifs dans les criblages. En effet, des taux de faux négatifs entre 8 et 34% ont été rapportés dans Drosophile (Liu et al., 2009 Booker et al., 2011) et des cellules humaines (Neumann et al., 2010). Il est donc probable que notre validation d'écran virtuel ait sous-estimé la puissance de prédiction du noyau et fournisse plutôt une borne inférieure sur les performances de prédiction.

Il est également à noter que les gènes non représentés dans les données sources ne sont pas accessibles à la méthode. Pour pouvoir sélectionner des gènes complètement non caractérisés, des ensembles de données expérimentales à l'échelle du génome ou des données ab initio (par exemple, dérivées de séquences) devraient être inclus. Cependant, nos tests préliminaires de données de puces à ADN à l'échelle du génome et d'interactions prédites basées sur les séquences nous ont amenés à exclure ces ensembles de données pour faire des prédictions en raison de performances médiocres.

Bien que l'approche par combinaison de noyaux ait légèrement mais systématiquement surpassé GeneMANIA, nous notons qu'il est difficile de démontrer que n'importe quelle approche est la meilleure possible sans une validation expérimentale approfondie de toutes les méthodes alternatives. Néanmoins, le taux de réussite de nos prédictions représente une multiplication par cinq par rapport au criblage à l'échelle du génome, ce qui, dans ce contexte, rend le classement des gènes basé sur le noyau et dérivé de graphes d'une valeur pratique. Par exemple, l'extension de notre test d'imagerie time-lapse haute résolution pour couvrir les 21 000 gènes codant pour les protéines identifiés dans le génome humain nécessiterait plus de 200 To d'espace disque juste pour stocker les images de microscopie, et le coût en réactifs et les consommables à eux seuls atteindraient plusieurs centaines de milliers de dollars. Par conséquent, le présélection in silico à l'échelle du génome des gènes pour concentrer les tests expérimentaux sur les candidats les mieux classés peut être une excellente alternative aux expériences coûteuses et à forte intensité de main-d'œuvre à l'échelle du génome. Les noyaux sur les nœuds de graphes représentent une méthode puissante pour la prédiction de la fonction des gènes, représentant un « entonnoir » facile à utiliser pour la sélection de gènes candidats, et nous mettons donc notre logiciel à la disposition de la communauté gratuitement sur http://funl.org.

Les noyaux prédisent de nouveaux gènes qui fonctionnent dans la condensation des chromosomes

Trouver de nouveaux gènes de condensation chromosomique s'est avéré difficile pendant de nombreuses années. Ceci est probablement dû au fait que la condensation nécessite de multiples activités contributives qui, lorsqu'elles sont simplement inactivées, ne produiraient que des défauts de condensation mineurs et transitoires. La capture de ces phénotypes subtils nécessite donc un suivi quantitatif de la condensation chromosomique dans les cellules vivantes, ce qui est très difficile à faire à l'échelle du génome mais est réalisable avec un ensemble de gènes candidats. Nous avons donc utilisé cette lecture phénotypique très sensible pour cribler les 100 premiers gènes prédits par le noyau impliqués dans la condensation mitotique des chromosomes. Étonnamment, ceux-ci contenaient 32 nouveaux gènes qui provoquaient un phénotype de condensation chromosomique mitotique reproductible lors de la précipitation qui n'avait pas été décrit auparavant dans les cellules de mammifères. Onze des 32 gènes sont considérés comme positifs à haute confiance et ouvrent donc de nouvelles voies d'expérimentation. Par exemple, TRAF3IP1 est impliqué dans la formation du cil primaire (Berbari et al., 2011) et a également été impliqué dans les voies de transduction du signal (Niu et al., 2003 Ng et al., 2011) mais pas dans la condensation chromosomique. Notre étude clarifie également plusieurs pistes de la littérature qui n'avaient pas été suivies. Par exemple, les histones désacétylases ont été impliquées dans la condensation chromosomique avec des résultats contradictoires (par exemple, Cimini et al., 2003 et al., 2005) et sans résoudre l'identité du ou des HDAC impliqués. De même, l'ADN méthylase DNMT3B a été trouvée associée aux gènes de la chromatine, y compris plusieurs sous-unités de condensine (Geiman et al., 2004), mais son rôle dans la condensation mitotique des chromosomes n'avait pas été démontré. Notre travail met également en évidence comment une approche informatique peut trouver des connexions indirectes entre les gènes qui seraient autrement difficiles à trouver manuellement. Par exemple, alors que PAPD5 est postulé comme un composant du complexe TRAMP humain impliqué dans la polyadénylation des ARN et leur ciblage ultérieur pour la dégradation par l'exosome (Schmidt et Butler, 2013), une mutation dans trf4, une PAPD5 homologue dans Saccharomyces cerevisiae, interagit génétiquement avec Top 1 délétion pour provoquer des défauts dans la condensation de l'ADN ribosomique (Castaño et al., 1996).

L'analyse quantitative de la condensation chromosomique de la prophase révèle un nouvel aspect fonctionnel

Bien que la condensation chromosomique mitotique soit intrinsèquement un processus dynamique, très peu d'études l'ont quantifiée dans des cellules vivantes avec une résolution temporelle élevée et, à notre connaissance, aucune analyse de perturbations du processus de condensation sur cellules vivantes n'a été rapportée. Les changements dans la texture de la chromatine marquée par fluorescence entre l'interphase et la prométaphase sont couramment utilisés pour définir la prophase. Notre criblage était basé sur l'hypothèse que cette définition de la prophase reflète les changements de volume de chromatine. Pour tester cette hypothèse et caractériser davantage la condensation chromosomique, nous avons analysé par ordinateur des images haute résolution de la microscopie confocale 3D time-lapse pour quantifier le volume de chromatine pendant la mitose dans les cellules de contrôle et dans les knockdowns de plusieurs hits de l'écran. Les variations observées du volume de chromatine étaient bien corrélées avec la longueur de la prophase telle que définie par la classification de la texture dans toutes les conditions, confirmant que la texture de la chromatine est un bon indicateur de condensation chromosomique. Les mesures de volume ont montré que les knockdowns de gènes affectaient principalement la cinétique de compactage plutôt que l'état de compactage final de la chromatine, conformément à l'hypothèse de phénotypes subtils dus aux exigences additives de plusieurs facteurs. L'analyse volumique a en outre révélé qu'en l'absence de condensation de la prophase, la chromatine s'est dilatée de manière transitoire lorsque la contrainte de la limite de l'enveloppe nucléaire a été relâchée par sa rupture à la fin de la prophase. Bien que le compactage rapide du chromosome de la prophase ait rapidement inversé cette expansion, cette observation suggère une nouvelle fonction potentielle pour la condensation de la prophase, c'est-à-dire empêcher la fuite de chromatine du noyau à la NEBD.


Un suppresseur extragénique de la mutation Bimd6 défectueuse de la mitose des codes d'Aspergillus Nidulans pour une protéine d'échafaudage chromosomique

Nous avons précédemment identifié un gène, bimD, qui fonctionne dans la ségrégation des chromosomes et contient des séquences suggérant qu'il pourrait s'agir d'une protéine de liaison à l'ADN. Deux mutations conditionnellement létales dans l'arrêt BIMD avec des fuseaux mitotiques aberrants à température restrictive. Ces fuseaux ont un tiers du nombre normal de microtubules, et les chromosomes ne s'attachent jamais aux microtubules restants. Pour cette raison, nous avons émis l'hypothèse que le BIMD fonctionnait dans la ségrégation des chromosomes, peut-être en tant que composant du kinétochore. Pour identifier d'autres composants qui fonctionnent avec bimD, nous avons effectué un criblage pour les suppresseurs extragéniques des mutations bimD5 et bimD6. Nous avons isolé sept suppresseurs extragéniques sensibles au froid de la sensibilité à la chaleur du bimD6 qui représentent trois ou peut-être quatre gènes sud distincts. Nous avons cloné l'un des gènes suppresseurs par complémentation du phénotype sensible au froid de la mutation sudA3. SUDA appartient à la famille des protéines DA-box. Il a été démontré que les protéines DA-box fonctionnent dans la structure et la ségrégation des chromosomes. Ainsi, les gènes bimD et sud fonctionnent de manière coopérative dans la ségrégation des chromosomes chez Aspergillus nidulans.


Les références

Pines, J. Cyclines et kinases dépendantes des cyclines: un point de vue biochimique. Biochimie. J. 308, 697–711 (1995).

Hershko, A. & Ciechanover, A. Le système ubiquitine. Annu. Rév. Biochem. 67, 425–479 (1998).

Peters, J.-M. SCF et APC : le Yin et le Yang de la protéolyse régulée du cycle cellulaire. Cour. Avis. Cell Biol. 10, 759–768 (1998).

Michael, W. M. & Newport, J. Couplage de la mitose à l'achèvement de la phase S par la dégradation de Wee1 médiée par Cdc34. Science 282, 1886–1889 (1998).

Kaiser, P., Sia, R. A. L., Bardes, E. G. S., Lew, D. J. & Reed, S. I. Cdc34 et la protéine F-box Met30 sont nécessaires pour la dégradation de la kinase cdk-inhibitory Swe1. Gènes Dev. 12, 2587–2597 (1998).

Schwob, E., Bohm, T., Mendenhall, M. D. & Nasmyth, K. L'inhibiteur de cycline kinase de type B p40 SIC1 contrôle la transition G1 à S dans S. cerevisiae. Cellule 79, 233–244 (1994).

Feldman, R.M.R., Correll, C.C., Kaplan, K.B. & Deshaies, R.J. Un complexe de Cdc4p, Skp1p et Cdc53p/Cullin catalyse l'ubiquitination de l'inhibiteur de CDK phosphorylé Sic1p. Cellule 91, 221–230 (1997).

Skowyra, D., Craig, K.L., Tyers, M., Elledge, S.J. & Harper, J.W. Les protéines F-Box sont des récepteurs qui recrutent des substrats phosphorylés pour le complexe SCF ubiquitine-ligase. Cellule 91, 209–219 (1997).

Kamura, T. et al. Rbx1, un composant du complexe suppresseur de tumeur VHL et de l'ubiquitine ligase SCF. Science 284, 657– 661 (1999).

Skowyra, D. et al. Reconstitution de l'ubiquitination de la cycline G1 avec des complexes contenant SCFGrr1 et Rbx1. Science 284, 662–665 (1999).

Ohta, T., Michel, J. J., Schottelius, A. J. & Xiong, Y. ROC1, un homologue d'APC11, représente une famille de partenaires cullin avec une activité ubiquitine ligase associée. Mol. Cellule 3, 535–541 (1999).

Tan, P. et al. Recrutement d'une ubiquitine ligase ROC1-CUL1 par Skp1 et HOS pour catalyser l'ubiquitination d'IkBα. Mol. Cellule 3, 527–533 (1999).

Bai, C. et al. SKP1 relie les régulateurs du cycle cellulaire à la machinerie de protéolyse de l'ubiquitine via un nouveau motif, la F-box. Cellule 86, 263–274 (1996).

Deshaies, R. J., Chau, V. & Kirschner, M. Ubiquitination de la cycline G1 Cln2p par une voie dépendante de Cdc34p. EMBO J. 14, 303– 312 (1995).

Willems, A.R. et al. Cdc53 cible les cyclines G1 phosphorylées pour la dégradation par la voie protéolytique de l'ubiquitine. Cellule 86, 453–463 (1996).

Henchoz, S. et al. Dégradation dépendante de la phosphorylation et de l'ubiquitine de l'inhibiteur de la kinase dépendante de la cycline Far1p chez la levure en herbe. Gènes Dev. 11, 3046–3060 (1997).

Kipreos, E. T., Lander, L. E., Wing, J. P., He, W. W. & Hedgecock, E. M. cul-1 est requis pour la sortie du cycle cellulaire dans C. elegans et identifie une nouvelle famille de gènes. Cellule 85, 829–839 (1996).

Pause, A. et al. Le produit du gène suppresseur de tumeur von Hippel-Lindau forme un complexe stable avec la CUL-2 humaine, un membre de la famille de protéines Cdc53. Proc. Natl Acad. Sci. Etats-Unis 94, 2155– 2161 (1997).

Lonergan, K.M. et al. La régulation des ARNm inductibles par l'hypoxie par la protéine suppresseur de tumeur de von Hippel-Lindau nécessite la liaison à des complexes contenant des élongines B/C et Cul2. Mol. Cell Biol. 18, 732– 741 (1998).

Lisztwan, J., Imbert, G., Wirbelauer, C., Gstaiger, M. & Krek, W. La protéine suppresseur de tumeur von Hippel-Lindau est un composant d'une activité E3 ubiquitine-protéine ligase. Gènes Dev. 13, 1822–1833 (1999).

Maxwell, P.H. et al. La protéine suppresseur de tumeur VHL cible les facteurs inductibles par l'hypoxie pour la protéolyse dépendante de l'oxygène. La nature 399, 271–275 (1999).

Kaelin, W. G. & Maher, E. R. Le paradigme du gène suppresseur de tumeur VHL. Tendances Genet. 14, 423– 426 (1998).

Hedgecock, E. M. & White, J. G. Tissus polyploïdes chez le nématode Caenorhabditis elegans. Dév. Biol. 107, 128–133 (1985).

Feu, A. et al. Interférence génétique puissante et spécifique par l'ARN double brin dans Caenorhabditis elegans. La nature 391, 806–811 (1998).

Hong, G., Roy, R. & Ambros, V. La régulation du développement d'un inhibiteur de la kinase dépendante de la cycline contrôle la progression du cycle cellulaire post-embryonnaire dans C. elegans. Développement 125, 3585–3597 (1998).

Mains, P. E., Kemphues, K. J., Sprunger, S. A., Sulston, I. A. & Wood, W. B. Mutations affectant les divisions méiotiques et mitotiques du début Caenorhabditis elegans embryon. La génétique 126, 593–605 (1990).

Edgar, L. G. & McGhee, J. D. La synthèse de l'ADN et le contrôle de l'expression des gènes embryonnaires dans C. elegans. Cellule 53, 589–599 (1988).

Hendzel, M.J. et al. La phosphorylation spécifique à la mitose de l'histone H3 s'initie principalement au sein de l'hétérochromatine péricentromérique pendant G2 et se propage de manière ordonnée coïncidant avec la condensation chromosomique mitotique. Chromosome 106, 348–360 (1997).

Wei, Y., Yu, L., Bowen, J., Gorovsky, M. A. & Allis, C. D. La phosphorylation de l'histone H3 est requise pour une condensation et une ségrégation chromosomiques appropriées. Cellule 97, 99–109 (1999).

Koshland, D. & Strunnikov, A. Condensation des chromosomes mitotiques. Annu. Rév. Cell Dev. Biol. 12, 305– 333 (1996).

Boxem, M., Srinivasan, D. G. & van den Heuvel, S. Le Caenorhabditis elegans gène ncc-1 code pour une kinase liée à cdc2 requise pour la phase M dans les divisions cellulaires méiotiques et mitotiques, mais pas pour la phase S. Développement 126, 2227–2239 (1999).

Stebbins, C. E., Kaelin, W. G. & Pavletich, N. P. Structure du complexe VHL-ElonginC-ElonginB : implications pour la fonction de suppression de tumeur VHL. Science 284, 455–461 (1999).

Kamura, T. et al. Le complexe élongine BC interagit avec le motif de boîte SOCS conservé présent chez les membres des familles de répétitions SOCS, ras, WD-40 et ankyrine. Gènes Dev. 12, 3872– 3881 (1998).

Zhang, J.-G. et al. Le motif de boîte SOCS conservé dans les suppresseurs de la signalisation des cytokines se lie aux élongines B et C et peut coupler les protéines liées à la dégradation du protéasome. Proc. Natl Acad. Sci. Etats-Unis 96, 2071– 2076 (1999).

Pause, A., Lee, S., Lonergan, K. M. & Klausner, R. D. Le gène suppresseur de tumeur von Hippel-Lindau est requis pour la sortie du cycle cellulaire lors du retrait du sérum. Proc. Natl Acad. Sci. Etats-Unis 95, 993– 998 (1998).

Kim, M. et al. L'adénovirus recombinant exprimant l'arrêt du cycle cellulaire médié par Von Hippel-Lindau est associé à l'induction de l'inhibiteur de kinase p27 Kip1 dépendant de la cycline. Biochimie. Biophys. Rés. Comm. 253, 672–677 (1998).

Carrano, A. C., Eytan, E., Hershko, A. & Pagano, M. SKP2 est requis pour la dégradation médiée par l'ubiquitine de l'inhibiteur de CDK p27. Nature Cell Biol. 1, 193–199 (1999).

Sutterluty, H. et al. p45 SKP2 favorise la dégradation de p27 Kip1 et induit la phase S dans les cellules quiescentes. Nature Cell Biol. 1, 207–214 (1999).

Tsvetkov, L. M., Yeh, K.-H., Lee, S.-J., Sun, H. & Zhang, H. p27 L'ubiquitination et la dégradation de Kip1 sont régulées par le complexe SCF Skp2 via le Thr187 phosphorylé dans p27. Cour. Biol. 9, 661–664 (1999).

Yu, Z.-K., Gervais, J. L. M. & Zhang, H. Human CUL-1 s'associe au complexe SKP1/SKP2 et régule les protéines p21 CIP1/WAF1 et cycline D. Proc. Natl Acad. Sci. Etats-Unis 95, 11324–11329 (1998).

Kirby, C., Kusch, M. & Kemphues, K. Mutation in the par genes of Caenorhabditis elegans affecter la réorganisation cytoplasmique au cours du premier cycle cellulaire. Dév. Biol. 142, 203–215 (1990).

Plasterk, R. H. A. dans Caenorhabditis elegans : Analyse biologique moderne d'un organisme. Méthodes en biologie cellulaire Vol. 48 (eds Epstein, H. F. & Shakes, D. C.) 59-80 (Academic, San Diego, 1995).

Les C. elegans Consortium de séquençage. Séquence du génome du nématode C. elegans: une plateforme d'investigation en biologie. Science 282, 2012–2018 (1998).

Krause, M. & Hirsh, D. Un leader trans-épissé sur l'ARNm de l'actine dans C. elegans. Cellule 49, 753– 761 (1987).

Thompson, J. D., Higgins, D. G. & amp Gibson, T. J. CLUSTAL W : amélioration de la sensibilité de l'alignement progressif de séquences multiples grâce à la pondération des séquences, aux pénalités d'écart spécifiques aux positions et au choix de la matrice de poids. Acides nucléiques Res. 22, 4673–4680 (1994).

Swofford, D. L. PAUP : Analyse phylogénétique avec parcimonie Version 3.1. (Illinois Nat. Hist. Survey, Champaign, IL, 1993).

Harlow, E. & Lane, D. Anticorps (Un manuel de laboratoire) (Cold Spring Harb. Lab., Cold Spring Harb., NY, 1988).

Miller, D. M. & Shakes, D. C. dans Caenorhabditis elegans : Analyse biologique moderne d'un organisme. Méthodes en biologie cellulaire Vol. 48 (eds Epstein, H.F. & Shakes, D.C.) 365-394 (Academic, San Diego, 1995).

Schumacher, J. M., Ashcroft, N., Donovan, P. J. & Golden, A. Une kinase centrosomique hautement conservée, AIR-1, est requise pour la progression précise du cycle cellulaire et la ségrégation des facteurs de développement dans Caenorhabditis elegans embryons. Développement 125, 4391–4402 (1998).

Seydoux, G. & Fire, A. dans Caenorhabditis elegans : Analyse biologique moderne d'un organisme. Méthodes en biologie cellulaire Vol. 48 (eds Epstein, H. F. & Shakes, D. C.) 323-339 (Academic, San Diego, 1995).

Johnson, C. lors de la 11e réunion internationale de C. elegans du 28 mai au 1er juin 1997 (Univ. Wisconsin, Madison, WI, États-Unis).


Condensation chromosomique : différences maternelles et paternelles

Condensation chromosomique : différences maternelles et paternelles. J Cell Sci 15 juillet 2002 115 (14) : e1405. est ce que je:


Watch the video: Isoler facilement la sous-toiture avec des panneaux de polystyrène - Tuto bricolage avec Robert (Décembre 2022).